Мета: клонувати, експресувати у бакуловірусній системі (БВС) та очистити пухлинний антиген SSX2 та використати його для скринінгу сироватки крові здорових донорів та хворих на меланому. Матеріали та методи: використано БВС експресії, метод афінної хроматографії на Ni-NTA агарозі, імуноферментний аналіз для скринінгу сироватки крові хворих на меланому (n = 29) та здорових донорів (n = 27). Результати: з використанням БВС експресії клоновано та експресовано рекомбінантний антиген SSX2; SSX2 був очищений методом афінної хроматографії та використаний як антиген для ELISA. Порівнювальний аналіз сироваток крові хворих на меланому та здорових донорів виявив більш високий рівень SSX2 в сироватках хворих на меланому у порівнянні з таким у здорових донорів. Висновки: SSX2 антиген, експресований у БВС, можна застосовувати для серологічного аналізу сироватки крові онкологічних хворих.

The aim of present study was to develop a model for a functional analysis of a recently identified marker of the ovarian cancer - sodium-dependent phosphate transporter NaPi2b. For this purpose, we have created HEK293 stable cell lines expressing wild type or mutant forms of NaPi2b (T330V substitution in a large extracellular loop and a 6 amino acid residues deletion in the C-terminal cytoplasmic tail), revealed in the ovarian cancer cell lines. The expression of wild type and mutant forms NaPi2b in the stable cell lines created was confirmed by Western-blot analysis with monoclonal antibodies against NaPi2b. The cellular models described here will be useful for studying the function of sodium-dependent phosphate transporter NaPi2b in health and disease.

Індекс рубрикатора НБУВ: Р569.715.2-4

Рубрики:

Пухлини яєчників

Шифр НБУВ: Ж14252 Пошук видання у каталогах НБУВ 

Індекс рубрикатора НБУВ: Е70*725.111.3

Рубрики:

Біологія людини

Шифр НБУВ: Ж14252 Пошук видання у каталогах НБУВ 

Зазначено, що натрій-залежний транспортер фосфату NaPi2b бере участь у перенесенні неорганічного фосфату та підтриманні фосфатного гомеостазу в організмі людини. Нещодавно NaPi2b описано як маркер раку яєчника МХ35. Моноклональні антитіла (МКАТ) проти транспортера NaPi2b, які одержали назву МХ35, виявляють терапевтичну ефективність під час лікування хворих на рак яєчника. Мета роботи - з'ясувати, чи впливає зв'язування МКАТ МХ35 із NaPi2b на його функцію транспортувати іони неорганічного фосфату в клітинних моделях. Клітини лінії НЕК293, що стабільно експресують дикий тип NaPi2b і мутантну форму NaPi2b_T330V, яка не розпізнається антитілами МХ35, інкубовано з антитілами МХ35, після чого проаналізовано поглинання клітинами радіоактивно міченого фосфату. Після інкубації з антитілами МХ35 у концентрації 50 мкг/мл відмічено значне зменшення поглинання фосфату клітинами, які експресують дикий тип NaPi2b. Для клітин, що експресують мутантну форму NaPi2b_T330V, за аналогічних експериментальних умов значних змін у поглинанні фосфату не виявлено. Результати роботи свідчать про 1,8-разове зниження NaPi2b-залежного транспорту фосфату в результаті інкубації з МКАТ МХ35, які можуть слугувати специфічним інгібітором функції NaPi2b.

Індекс рубрикатора НБУВ: Р56-2 + Е70*74*871

Рубрики:

Онкологія

Біологія людини

Шифр НБУВ: Ж14252 Пошук видання у каталогах НБУВ 

In this study we describe the identification of sodium-dependent phosphate transporter NaPi2b as MX35 cancer-associated antigen. To achieve this goal we have screened extensively a cDNA expressing library from ovarian cancer cell line OVCAR3 with monoclonal antibody MX35. To further confirm the authenticity of this finding, we showed that bacterially and baculovirally expressed NaPi2b is specifically recognized by MX35 antibody. Moreover, the validity of these results was verified in a parallel study involving affinity purification and mass spectrometry. The epitope for MX35 monoclonal antibody was mapped to the largest extracellular loop of NaPi2b. Taken together, this study uncovers the identity of MX35 antigen and provides molecular tools for studying its function in normal and cancer tissues.

Індекс рубрикатора НБУВ: Р569.715.2

Рубрики:

Пухлини яєчників

Шифр НБУВ: Ж14252 Пошук видання у каталогах НБУВ 

Незважаючи на інтенсивні дослідження, механізми активації цитокінових рецепторів наразі є не зовсім зрозумілими. Історично було запропоновано 2 моделі: у ранніх роботах припускали механізм ліганд-індукованої димеризації рецепторів, що призводить до активації більш пізніх сигнальних шляхів, у той час як за відсутності лігандів рецептори перебувають у мономерому неактивованому стані. Подальшими дослідженнями виявлено докази існування багатьох рецепторів у формі неактивованих сформованих димерів, які під час зв'язування ліганда зазнають конформаційних змін та/або мономери яких розпочинають ротаційно переміщуватися відносно один одного. Досліджено проблему димеризації окремих гомодимерних рецепторів цитокінів, які причетні до регуляції кровотворення.

Індекс рубрикатора НБУВ: Е0*74*871 + Р562

Рубрики:

Загальна біологія

Окремі види пухлин

Шифр НБУВ: Ж21341/а Пошук видання у каталогах НБУВ 

Aim - the main purpose of this study was to estimate the SLC34A2 gene expression in normal ovary and different types of ovarian tumors. We have investigated SLC34A2 gene expression level in papillary serous, endometrioid, unspecified adenocarcinomas, benign tumors, and normal ovarian tissues using real-time PCR analysis. Differences in gene expression were calculated as fold changes in gene expression in ovarian carcinomas and benign tumors compared to normal ovary. We have found that SLC34A2 gene was highly expressed in well-differentiated endometrioid and papillary serous ovarian carcinomas compared to low-differentiated endometrioid carcinomas, benign serous cystoadenomas and normal ovary. Analysis of SLC34A2 gene expression according to tumor differentiation level (poor- and well-differentiated) showed that SLC34A2 is up-regulated in well differentiated tumors. Conclusion: upregulation of SLC34A2 gene expression in well-differentiated tumors may reflect cell differentiation processes during ovarian cancerogenesis and could serve as potential marker for ovarian cancer diagnosis and prognosis.