Получение трансгенных растений моркови (Daucus carota L.), экспрессирующих гены секреторных протеинов Mycobacterium tuberculosis

Лучакивская, Ю. С.; Кищенко, Е. М.; Василенко, М. Ю.; Симоненко, Ю. В.; Кучук, Н. В.

Последние исследования показали высокую иммуногенность секреторных протеинов Mycobacterium tuberculosis Ag85B и ESAT6, поэтому было предложено использовать их в качестве компонентов новой противотуберкулезной вакцины вместо широко используемой ныне BCG. Поскольку растения считают более безопасной и экономически целесообразной системой экспрессии для получения рекомбинантных протеинов по сравнению с системами на основе микроорганизмов и культур животных клеток, активно разрабатывается концепция "съедобных вакцин" на основе продуцентов вакциногенных протеинов - трансгенных растений, плоды, листья и корнеплоды которых можно употреблять в пищу. Показана возможность получения растений моркови сортов Нантская, Каротель, Красный Великан, Амстердамская и Перфекция, способных экспрессировать гены секреторных протеинов Mycobacterium tuberculosis. Перенос генов происходил с помощью агробактериальной трансформации с использованием штаммов GV3101 Agrobacterium tumefaciens и A4 Agrobacterium rhizogenes. Бинарные векторы содержали гены протеинов Ag85B, Ag85B(<$E DELTA roman ТМD>), ESAT6 и слитого протеина Ag85B(<$E DELTA roman TMD>)-ESAT6 под контролем конститутивного 35S промотора ВМЦК и корнеспецифического Mll промотора сахарной свеклы. Молекулярно-биологический анализ позволил подтвердить присутствие и транскрипцию селективного гена nptII для всех анализируемых растений, а также генов fbpB и esxA для 92 - 95 % из них. При этом частота и эффективность трансформации достоверно не зависела от сорта растений. Вестерн-блот-анализ подтвердил присутствие рекомбинантных протеинов для некоторых растительныx линий.


	Наукова періодика України		Biotechnologia Acta