Опрацьовано новий метод виділення, очищення та стабілізації L-лактат: цитохром с оксидоредуктази (КФ 1.1.2.3; флавоцитохром b2, ФЦ b2) із клітин рекомбінантного штама дріжджів Ogataea (Hansenula) polymorpha "tr1" (gcr1 catX CYB2) та досліджено фізико-хімічні властивості очищених препаратів ферменту. Штам характеризується порушенням глюкозної катаболітної репресії та п'ятикратним надсинтезом ФЦ b2, порівняно із батьківським штамом дикого типу. Для забезпечення максимального виходу мембранозв'язаного ФЦ b2, досліджено вплив низки детергентів і оптимізовано умови виділення ферменту. Для очищення ФЦ b2 розроблено новий метод афінної хроматографії, який грунтується на використанні цитохрому с як природного ліганда, іммобілізованого на амінопропілсилохромі. Ефективність розробленого методу афінної хроматографії було порівняно з іонообмінною хроматографією на DЕАЕ-Toyopearl 650M целюлозі. За використання обох типів хроматографії питома активність ФЦ b2 у ферментних препаратах становила <$E 10~roman {Од.~cdot~мг sup -1}>, а вихід очищеного ферменту коливався в межах 75 - 95 %. Ступінь очищення цільового ферменту від баластних білків оцінено за допомогою електрофорезу в ПААГ за денатуруючих умов за наявності SDS. Досліджено дію низки стабілізуючих агентів і умов зберігання, щоби забезпечити підтримання максимальної активності ФЦ b2. Найкращий стабілізуючий ефект спостерігали за використання 70 % амонію сульфату і зберігання препарату за температури -20 <$E symbol Р>C. Визначено деякі фізико-хімічні параметри очищеного ферменту з клітин O. polymorрha "tr1", зокрема: молекулярну масу і спектральні характеристики окисленої та відновленої форм фермента.

  Повний текст PDF - 709.139 Kb    Зміст випуску     Цитування публікації

  Якщо, ви не знайшли інформацію про автора(ів) публікації, маєте бажання виправити або відобразити більш докладну інформацію про науковців України запрошуємо заповнити "Анкету науковця"