Молекулярні технології в детекції чутливих та стійких до ізоніазиду мікобактерій туберкульозу

Лиманська, О. Ю.; Лиманський, О. П.

Розроблено два варіанти детекції однонуклеотидних поліморфізмів у кодоні 315 гена katG мікобактерій туберкульозу (МТБ), мутації в якому асоційовані з резистентністю до ізоніазиду - протитуберкульозного препарату першого ряду. Два набори праймерів, кожний з яких містить додатковий конкурентний блокуючий праймер з 3'-термінальною фосфатною групою (для елімінації неспецифічної ампліфікації), дозволяють у кодоні 315 гена katG виявляти точкові мутації AGC <$E symbol О> ACC та AGC <$E symbol О> AGA, що найчастіше зустрічаються. Проведення ПЛР з набором із двох праймерів, один з яких містить п'ять LNA-мономерів, дозволяє встановити наявність будь-якого з шести відомих варіантів мутацій у кодоні 315 гена katG, тобто диференціювати чутливі та резистентні до ізоніазиду МТБ. Чистоту та будову праймерів довжиною 17 нуклеотидів, що містять LNA-модифіковані нуклеотиди, охарактеризовано часопролітною мас-спектрометрією з матрично-активованою лазерною десорбцією/іонізацією, а 17-вимірний дуплекс, утворений двома комплементарними олігонуклеотидами з LNA-мономерами, - за допомогою методу термічної денатурації. Створені молекулярно-генетичні тест-системи для виявлення ізолятів дикого типу та резистентних МТБ до протитуберкульозного препарату першого ряду ізоніазиду можуть застосовуватися у клінічних лабораторіях зі стандартним ПЛР-обладнанням та дозволяють скоротити визначення резистентності МТБ до ізоніазиду з 1 - 3 місяців стандартними бактеріологічними методами до 1 - 3 днів шляхом ПЛР.


	Наукова періодика України		Цитологія і генетика