Простий
пошук
Розширений
пошук
Покажчики
Професійний
пошук
Рубрикатор
НБУВ
Розподілений
пошук

Бази даних

Наукова періодика України - результати пошуку

Книжкові видання та компакт-диски
Журнали та продовжувані видання
Автореферати дисертацій
Реферативна база даних
Наукова періодика України
Тематичний навігатор
Авторитетний файл імен осіб
Mozilla Firefox Для швидкої роботи та реалізації всіх функціональних можливостей пошукової системи використовуйте браузер
"Mozilla Firefox"
Вид пошуку
Повнотекстовий пошук
 Знайдено в інших БД:Реферативна база даних (1)
Список видань за алфавітом назв:
A  B  C  D  E  F  G  H  I  J  L  M  N  O  P  R  S  T  U  V  W  
А  Б  В  Г  Ґ  Д  Е  Є  Ж  З  И  І  К  Л  М  Н  О  П  Р  С  Т  У  Ф  Х  Ц  Ч  Ш  Щ  Э  Ю  Я  

Авторський покажчик    Покажчик назв публікацій


Пошуковий запит: (<.>AT=Rybak Cloning, expression and purification$<.>)
Загальна кількість знайдених документів : 1
1.

Rybak M. Yu. 
Cloning, expression and purification of D-Tyr-tRNA Tyr -deacylase from Thermus thermophilus [Електронний ресурс] / M. Yu. Rybak, O. P. Kovalenko, I. A. Kryklyvyi, M. A. Tukalo // Biopolymers and cell. - 2015. - Vol. 31, № 3. - С. 179-186. - Режим доступу: http://nbuv.gov.ua/UJRN/BPK_2015_31_3_4
D-Тир-тРНК<^>Тир-деацилаза (DTD) є консервативним білком, що забезпечує додатковий коригувальний етап гідролізу помилково аміноацильованих субстратів D-Тир-тРНК<^>Тир. DTD здатна приcкорювати гідроліз ефірного зв'язку в комплексі D-Тир-тРНК<^>Тир, утворюючи вільну тРНК та D-Тир, таким чином запобігаючи включенню D-амінокислот до білків. Деацилаза розрізняє D- та L-аміноацильні залишки в аміноацильованій тРНК та не гідролізує останні. Структурні основи такої специфічності та механізм гідролізу D-аміноацил-тРНК за участі DTD є недостатньо зрозумілими. Мета. Клонувати D-Тир-тРНК<^>Тир-деацилазу з T. thermophilus(DTDTT), оптимізувати умови її експресії в E. coli, розробити ефективний метод очищення з високим виходом високоякісного ферменту, для структурних та функціональних досліджень. Ампліфікацію та клонування гена DTD з геномної ДНК T. thermophilus в pProEXHTb експресуючий вектор проведено за стандартними молекулярно-біологічними методами. Очистку рекомбінантного DTD білка проведено хроматографічно. Залишки гістидину відщеплено від DTD протеазою вірусу тютюну (TEV), ефективність реакції перевірено Вестерн-блот аналізом з анти-His-антитілами. Молекулярну масу очищеної DTDTT визначено гель-фільтрацією. Одержану конструкцію pProEXHTb, що містить DTD послідовність з T. thermophilus, експресовано в E.coli штаму BL21(DE3)pLysS. Цільовий рекомбінантний білок виділено і очищено комбінацією хроматографій: афінної (Ni-NTA), аніон-обмінної (Q-Sepharose) та гель-фільтрації (Superdex S200) до чистоти 90 %. Вихід рекомбінантної DTD склав 2 мг з одного літру культури. Визначена молекулярна маса очищеної DTD з T. thermophilus 32 кДа свідчить на користь її димерної структури. Висновки: одержаний вектор pProEXHTb, що містить DTD з T. thermophilus, і підібрані умови очистки надають змогу одержати рекомбінантний DTD в кількостях, достатніх для подальших структурно-функціональних досліджень.
Попередній перегляд:   Завантажити - 320.244 Kb    Зміст випуску    Реферативна БД     Цитування
 
Відділ наукової організації електронних інформаційних ресурсів
Пам`ятка користувача

Всі права захищені © Національна бібліотека України імені В. І. Вернадського