Розроблено метод афінної хроматографії шаперонінів на базі денатурованих білків. Запропонований метод використано для дослідження умов формування та дисоціації комплексу GroEL з денатурованими білками, що мають різні фізико-хімічні властивості, для виділення й очищення GroEL, а також для дослідження вмісту шаперонів у клітинах печінки щурів за оксидативного стресу. Установлено можливість швидкого та висококоефективного очищення шаперонінів прокаріотичних і еукаріотичних клітин за допомогою афінної хроматографії на основі денатурованих білків. Показано, що через добу після введення хлориду кадмію у клітинах печінки щурів збільшується кількість Hsp60. Показано суттєвий вплив іонної сили, двовалентних катіонів і лігандів GroEL (Hsp60 клітин Escherichia coli) на його взаємодію з денатурованими білками.

  Скачати повний текст

Визначено зміни структурно-функціональних властивостей окремих глобулярних білків, а саме: спектральних, кінетичних, електрофоретичних та інших характеристик - за дії змінного магнітного поля (МП) на розчини білків за умов відсутності та наявності гідрофобних лігандів - хлороформу та бензолу. Показано, що магнітне поле майже не впливає на спектри поглинання білків різної природи у нативному стані, але впливає на їх власну флуоресценцію залежно від частоти МП. Водночас дія фізичного фактора на структурно-функціональні властивості білкових розчинів є більш помітною за умов їх взаємодії з гідрофобними лігандами. На підставі результатів дослідження зроблено висновок, що насичення водно-білкових розчинів лігандами супроводжується формуванням спектральних зсувів, які доводять наявність зв'язування ліганду білковими молекулами. За таких умов змінне магнітне поле впливає більшою мірою. Хлороформ сприяє більш глибоким перебудовам у білкових макромолекулях у порівнянні з бензолом у випадку взаємодії з білковими розчинами за контрольних умов, а також за умов опромінення магнітним полем. Результати експериментів доводять припущення, що первинним акцептором магнітної дії може бути водне оточення макромолекул, на яке вплив магнітного поля призводить до змін його структурно-динамічних властивостей, внаслідок чого змінюється розчинність речовин та їх адсорбція на білкових макромолекулах.

  Скачати повний текст

  Скачати повний текст

Показано, що латротоксинподібний білок збільшує ступінь АТФ-викликаного злиття гомотипових мембран. Ця властивість латротоксинподібного білка може модулюватися процесами фосфорилювання-дефосфорилювання, зміною pH середовища та шляхом обробки білка N-етилмаліємідом. Встановлено, що латротоксинподібному білку притаманна АТФазна активність, характерна для білків ААА родини АТФаз. Показано, що аплікація 0,1 мкМ латротоксинподібного білка призводить до значного збільшення амплітуди кальцієвого струму P-типу (72 %) та меншому зростанню струму L-типу (33 %).

  Скачати повний текст

Виявлено та охарактеризовано нові білки партнерів кінази S6 рибосомального білка (S6K1) методом дріжджової двогібридної системи. В результаті проведеного скринування кДНК бібліотеки ембріонів миші ідентифіковано кДНК нового S6K1-зв'язувального білка - КоА-синтази. Вперше клоновано кДНК ген, що кодує КоА-синтазу. Доведено, що КоА-синтаза має дефосфоКоА-кіназну та фосфопантотенатаденілтрансферазну активності та каталізує два останні етапи біосинтезу КоА. Вперше показано, що КоА-синтаза взаємодіє з S6K1 в клітинах дріжджів та в клітинах ссавців. Встановлено, що С-кінцеві ділянки S6K1 та КоА-синтази залучені до утворення білкового комплексу. Продемонстровано мітохондріальну локалізацію КоА-синтази методами конфокальної мікроскопії та субклітинного фракціонування з використанням специфічних антитіл. Виявлено, що КоА-синтаза не є субстратом для S6K1 та встановлено відсутність взаємовпливу обох ферментів на їх активність. Обгрунтовано структурну роль даної взаємодії та виявлено її вплив на можливість S6K1 наближатися до мітохондрії з метою фосфорилювання її мітохондріальних субстратів.

  Скачати повний текст

Досліджено взаємодію хінолонового антибіотика норфлоксацину (NOR) з різними ароматичними біологічно активними сполуками (БАС) і ДНК у водному розчині. Одержано структурні та термодинамічні параметри самоасоціації NOR і гетероасоціації NOR - БАС. Установлено термодинамічні параметри взаємодії та характер зв'язування антибіотика з одноланцюговою та дуплексною формами ДНК. Досліджено процес сумісного зв'язування БАС з ДНК у трикомпонентних системах NOR - БАС - ДНК. Розраховано співвідношення ефективностей інтерцепторного та протекторного механізмів дії. Оцінено відносну зміну біологічного ефекту. Установлено межові концентрації ароматичних БАС, за яких може відбуватися зміна їх біологічної активності у разі їх комбінації з NOR.

  Скачати повний текст

Проведено порівняльне дослідження основних етапів обміну колагену, що забезпечують його стабільність на молекулярному та надмолекулярному рівнях у процесі температурної адаптації у пойкілотермних, гібернантних та гомойотермних тварин. Показано, що в усіх випадках основні етапи обміну колагену змінюються однаково, що забезпечує позитивну кореляцію між термостабільністю колагену та температурою навколишнього середовища. Така перебудова обміну пов'язана із зміною синтезу, процесінгу та розпаду колагену. В експериментах in vitro продемонстровано також, що при зниженні температури інкубаційного середовища інтенсифікується розпад більш термостабільного та синтез менш термостабільного колагену. Показано, що такі механізми швидкої адаптації колагенових утворень до температури середовища можуть безпосередньо використовуватися пойкілотермними хребетними, що існують в умовах різних сезонних змін температури. Схожі механізми використовуються і гібернантними ссавцями, температура тіла яких також може швидко змінюватися протягом короткого часу при переході від стану бадьорості до стану сплячки. Зроблено висновок, що у гомойотермних ссавців у ході еволюції також залишився реліктовий механізм температурної адаптації колагенового каркасу сполучної тканини.

  Скачати повний текст

Встановлено, що відмінності між групами опромінених та неопромінених пухлиноносіїв в печінці проявляються у початковий період росту карциноми Герена, причому найістотніші зміни відбуваються у клітинних ядрах: підвищення вмісту полідезоксирибонуклеотидів, посилення окиснення SH-груп гістонів та зниження інтенсивності включення міченого попередника в РНК у опромінених тварин. Визначено, що насуттєвіших змін у клітинах карциноми Герена опромінених щурів зазнає процес карбонілювання гістонів, інтенсивність якого підвищена в період першого тижня після трансплантації, а на подальших етапах росту новоутворення відбувається зниження рівня окиснювальної модифікації хроматинозв'язаних білків пухлинних клітин. Встановлено, що застосування фітопрепарату призводить до стабілізації процесів карбонілювання білків клітин печінки тварин-пухлоносіїв, причому в хроматині такі зміни відбуваються лише за умов його тривалого використанн. Зазначено, що введення тваринам з карциномою Герена 5,6-бензкумарину-5-урацилу змінює процеси окиснювальної модифікації білків хроматину та постнуклеарної фракції, а також пригнічує включення ³[H]-уридину в РНК ядер пухлинних клітин.

  Скачати повний текст