Скачати повний текст

  Скачати повний текст

Дисертацію присвячено вивченню механізмів набутої резистентності злоякісних клітин лінії L1210 лейкемії миші до дії протипухлинного препарату цисплатину. Встановлено, що клітини цієї лінії, які проявляють підвищену стійкісь до дії цисплатину, є резистентними до впливу трансформуючого фактора росту типу beta (ТФР beta). ТФР beta пригнічує ріст і індукує апоптоз у клітинах лінії L1210, але не в клітинах сублінії, резистентних до дії цисплатину. Причинами стійкості до впливу ТФР beta можуть бути знижена експресія в клітинах даної сублінії рецептора I типу ТФР beta та підвищена експресія білка Smad6 - внутрішньоклітинного інгібітора передачі сигналу цього цитокіна. Поява резистентності клітин лінії L1210 до дії цисплатину супроводжується змінами у складі глікопротеїнів клітинних мембран, підвищенням чутливості клітин до гіпертермії, а також підвищеною продукцією ТФР beta 1. Клітини лінії L1210 з підвищеною резистентністю до цисплатину зберігають чутливість до дії деяких рослинних лектинів, зокрема - аглютиніну 1 з омели.

  Скачати повний текст

  Скачати повний текст

Шляхом розрахунків визначено оптимальні щодо запобігання внутрішньоклітинній кристалізації режими охолодження клітин кісткового мозку за швидкого заморожування та охолодження з постійною швидкістю під захистом 1 і 1,5 М ДМСО. Теоретично знайдені оптимальні умови кріоконсервування підтверджено шляхом зіставлення з одержаними експериментальними даними. Доведено, що швидке двоступінчасте заморожування є більш ефективним для кріоконсервування клітин кісткового мозку миші, воно також забезпечує збереження основних трьох ростків кровотворення. Побудовано біофізичну кількісну модель процесу відмивання клітин від кріопротектора та на її основі визначено сприятливі умови одноразового відмивання відталих клітин кісткового мозку від диметилсульфоксиду.

  Скачати повний текст

Встановлено, що здатність до дозрівання ооцита - формування першого полярного тільця - є кальцієзалежною та змінюється залежно від фази естрального цикла миші. За допомогою блокаторів кальцієвих каналів L- і T-типів (верапаміла та амілорида відповідно) показано, що у процесі формування першого полярного тільця на оолемі ооцита миші функціонують переважно канали T-типу, їх роль є більш вираженою на стадії еструсу. Встановлено роль кумулюсних клітин у дозріванні ооцита. Показано, що контакт ооцита з кумулюсними клітинами призводить до секреції останніми термостабільних, активуючих мейоз факторів, які паракринно ініціюють відновлення мейотичного дозрівання ооцитів мишей. Показано пригнічуючий вплив великих доз і стимулювальних малих доз антиоваріальних антитіл у разі застосування in vivo та in vitro на фолікуло- й ооцитогенез. Встановлено роль кумулюсних клітин у стимуляції відновлення мейозу ооцитами під впливом антитіл. Встановлено пригнічувальний ефект верапаміла на ооцитогенез, який дає підставу для ствердження, що цей препарат, який широко застосовується для лікування серцево-судинних захворювань, може посилювати ризик розвитку безпліддя.

  Скачати повний текст

Встановлено та охарактеризовано будову трьох генів 21-ої хромосоми людини: аргінін-N-метилтрансферази 2 (HRMT1L1), нового ядерного білка (NNP-1) та інтерсектину 1 (ITSN1) та їх гомологів у миші. Вперше одержано повну нуклеотидну послідовність гена нового ядерного білка (NNP-1) миші. Ідентифіковано та ізольовано нуклеотидні послідовності кДНК генів аргінін-N-метилтрансферази 2, нового ядерного білка та інтерсектину 1 миші, які є гомологічними генами, картованими на довгому плечі 21-ої хромосоми людини. Вперше показано зміну рівня експресії гена аргінін-N-метилтрансферази 2 людини (HRMT1L1) у різних тканинах у процесі ембріогенезу. Встановлено, що рівень експресії генів аргінін-N-метилтрансферази 2 і NNP-1 є ідентичним у тканинах нормальних і трисомних мишей (Ts65Dn), що може вказувати на відсутність їх функціонального значення для розвитку синдрому Дауна. Одержано нові ізоформи транскриптів генів інтерсектину 1 людини та миші, показано їх тканинну специфічність.

  Скачати повний текст

Вивчено процеси масообміну клітин кісткового мозку та кордової крові з оточуючим середовищем на основних етапах кріоконсервування та встановлено зв'язок даних процесів із пошкодженням клітин унаслідок дії основних факторів кріопошкодження: внутрішньоклітинної кристалізації, дегі- та регідратації. За допомогою методів світлової мікроскопії, фізико-математичного моделювання, кріомікроскопії визначено особливості осмотичної поведінки клітин кісткового мозку миші та кордової крові людини на усіх основних етапах кріоконсервування (експозиція клітин у кріозахисному середовищі, охолодження, заморожування та відтавання, видалення кріопротектора з клітин). Виявлено параметри, що визначають процеси масопереносу води та кріопротекторів ДМСО, 1,2-пропадіолу, гліцерину у системі клітина - оточуюче середовище, що зумовлюють кріозахист і кріопошкодження. З використанням методів суправітального прокрашування, аналізу кількісного та якісного складу клітинних суспензій, адгезивної здатності та фагоцитарної активності встановлено припустимі межі зміни об'єму клітин, що не призводять до падіння їх життєздатності.

  Скачати повний текст

На підставі кількісного опису індивідуальної мінливості та міжвидових відмінностей за розмірами тіла та краніометричними (зокрема, мандибулярними та одонтометричними) ознаками охарактеризовано особливості чотирьох видів лісових мишей (S. uralensis, S. arianus, S. sylvaticus, S. tauricus) на території України: уточнено межі ареалів, описано географічні градієнти в мінливості, вікові зміни в їх зв'язку з міжвидовою алометрією, статевий диморфізм. Розроблено ідентифікаційні алгоритми, що дають змогу визначати видову належність лісових мишей за різними групами ознак (зокрема за сильно фрагментованим зубним матеріалом).

  Скачати повний текст

Виявлено та охарактеризовано нові білки партнерів кінази S6 рибосомального білка (S6K1) методом дріжджової двогібридної системи. В результаті проведеного скринування кДНК бібліотеки ембріонів миші ідентифіковано кДНК нового S6K1-зв'язувального білка - КоА-синтази. Вперше клоновано кДНК ген, що кодує КоА-синтазу. Доведено, що КоА-синтаза має дефосфоКоА-кіназну та фосфопантотенатаденілтрансферазну активності та каталізує два останні етапи біосинтезу КоА. Вперше показано, що КоА-синтаза взаємодіє з S6K1 в клітинах дріжджів та в клітинах ссавців. Встановлено, що С-кінцеві ділянки S6K1 та КоА-синтази залучені до утворення білкового комплексу. Продемонстровано мітохондріальну локалізацію КоА-синтази методами конфокальної мікроскопії та субклітинного фракціонування з використанням специфічних антитіл. Виявлено, що КоА-синтаза не є субстратом для S6K1 та встановлено відсутність взаємовпливу обох ферментів на їх активність. Обгрунтовано структурну роль даної взаємодії та виявлено її вплив на можливість S6K1 наближатися до мітохондрії з метою фосфорилювання її мітохондріальних субстратів.

  Скачати повний текст

Розроблено методи прижиттєвої діагностики олуланозу на базі мікроскопії змивів зі шлунка та біоптатів шлункової слизової. Встановлено, що неблагополучними щодо олуланозу є 63,63 % свинарських господарств Полісся та Лісостепу України, а вікова динаміка інвазії характеризується підвищенням рівня зараження з віком свиней. Виявлено, що джерелом олулан для свиней можуть бути собаки, коти, щури та миші. Під час розвитку олуланозного патологічного процесу встановлено супресію факторів імунобіологічного захисту, структурні порушення в печінці та холестаз. На підставі результатів визначення олуланоцидної активності універму та вивчення посттерапевтичних змін в організмі хворих на олуланоз свиней запропоновано схеми етіотропної та антгельмінтно-імуностимулювальної терапії (з використанням вірутрициду).

  Скачати повний текст

Визначено вплив факторів кріоконсервування (розчинів гліцерину, гіпотермії та заморожування з різними швидкостями) на рівень життєздатності, мітотичний режим та хромосомний набір 2 - 8-клітинних ембріонів миші. Визначено, що дроблення підвищує стійкість ембріонів до зниження температури, експозиція у розчинах гліцерину не призводить до збільшення рівня анеуплоїдії в ембріонах різних стадій, процедура швидкого заморожування у порівнянні з повільним програмним забезпечує більш високу збереженість бластомерів 8-клітинних ембріонів та не знижує рівень життєздатності. Методами цитологічного та цитогенетичного аналізу встановлено, що кріоконсервування 8-клітинних ембріонів незалежно від методу заморожування та ступеня їх компактизації не впливає на мітотичний індекс та рівень анеуплоїдії, але змінює спектр патологічних мітозів. За допомогою електронно-мікроскопічного дослідження виявлено, що 8-клітинні ембріони після швидкого заморожування характеризуються збереженістю ультраструктури ядра та основних органел цитоплазми бластомерів.

  Скачати повний текст

Вивчено осмотичну поведінку ооцитів та ембріонів миші на різних етапах кріоконсервування та визначено транспортні параметри клітин. Показано, що стадія розвитку суттєво не впливає на значення коефіцієнта проникності плазматичних мембран ембріонів для молекул води. Не встановлено вірогідних відмінностей коефіцієнтів проникності мембран 1- та 2-клітинних ембріонів для молекул етиленгліколю (виміряних у розчинах 10 %-ої концентрації), і тільки для 8-клітинних ембріонів спостерігається тенденція до зниження цього показника. Установлено, що запліднення та стадія розвитку не впливають на коефіцієнт проникності плазматичних мембран ембріонів миші для молекул 1,2-пропандіолу у межах перших трьох дроблень. Обгрунтовано використання етиленгліколь-сахарозного кріоконсервувального середовища для заморожування чутливих до дії факторів кріопошкодження 2-клітинних ембріонів миші.

  Скачати повний текст

З'ясовано механізми морфогенезу вад розвитку серця, обумовлених дією етанолу та ретиноєвої кислоти. Вивчено морфологічні перебудови, що призводять до формування вад серця в експериментальних моделях з використанням цих речовин. Кількісно оцінено структурні зміни в різних відділах серця - передсердях і шлуночках, міжшлуночковій і міжпередсередній перегородках, атріо-вентрикулярному каналі, конусно-стовбуровому відділі та клапанах серця - у разі формування вад розвитку серця в моделях, що відтворюють ураження нервового гребеня. Зіставлено механізми аномального морфогенезу у різних моделях. Проведено тривимірну реконструкцію нормально та аномально розвинутих ділянок серця зародків курки та миші. Одержано просторові уявлення про етапи формування різних вад серця, спричинених ушкодженням нервового гребеня. Здійснено зіставлення нормального кардіогенезу серця експериментальних тварин і людини. Визначено механізми аномального розвитку серця після дії етанолу та ретиноєвої кислоти, які взаємопов'язані з похідними нервового гребеня.

  Скачати повний текст

Розглянуто основні технологічні фактори, що впливають на одержання та культивування поза організмом тотипотентних клітин миші. Визначено умови й удосконалено методи одержання та довгострокового культивування ембріональних фібробластів миші, культуру яких використовують як фідерний шар для розвитку тотипотентних клітин ссавців. Запропоновано методи ефективного одержання клітин-попередників ЕСК. Розроблено новий спосіб трипсинізації ЕС-подібних клітин та ембріональних фібробластів миші. Доведено можливість довгострокового культивування ЕС-подібних клітин миші зі зберіганням їх недиференційованого стану. Модифіковано метод культивування тотипотентних бластомерів миші з метою збільшення ідентичного генетичного матеріалу. Наведено ілюстративний матеріал, що послідовно відображає всі стадії розвитку ембріональних фібробластів, ЕС-подібних клітин та ізольованих тотипотентних бластомерів миші у культурі.

  Скачати повний текст

Досліджено вплив відсутності гена pttg на активацію T-лімфоцитів миші та на регуляторні системи клітин, які індукують імунну відповідь організму на патоген. Установлено, що нокаут по гену pttg зумовлює зниження рівня бласт-трансформації T-лімфоцитів миші у відповідь на активацію мітогенами та затримку цих клітин на стадії S-клітинного циклу. З використанням методів протеоміки ідентифіковано 18 білків, експресія яких вірогідно змінена в активованих T-лімфоцитах без гена pttg у порівнянні з активованими T-лімфоцитами дикого типу.

  Скачати повний текст

  Скачати повний текст

Встановлено, що експресія мРНК PFKFB-2, PFKFB-3 і PFKFB-4, а також VEGF і Glut1 значно посилюється в злоякісних пухлинах грудної залози, легень та прямої кишки. Експресія PFKFB-4 виявлена в різних лініях трансформованих клітин, зокрема, простати, грудної і підшлункової залоз, печінки та легень. Розглянуто, що гіпоксія індукує експресію PFKFB-4 в різних лініях клітин, що ця індукція є HIF-зележною і опосередкована ідентифікованим залежним від гіпоксії елементом в 5'-регуляторній зоні гена. Виявлено три класи нових альтернативних сплайс-варіантів мРНК PFKFB-4 у клітинах людини та миші, визначено їх нуклеотидну послідовність. Зазначено, що більшість з них мають вставки в 6-фосфофрукто-2-кіназній частині або делеції в фруктозо-2,6-бісфосфататній частині, в наслідок чого альтернативний сплайс-варіант біфункціонального ферменту PFKFB-4 міг проявляти лише одну з двох активностей.

  Скачати повний текст

Досліджено функціональну роль бета-дефенсину-2 в пухлинних клітинах. Шляхом трансфекції плазмідними векторами, які містять кДНК гена повної та процесованої форми бета-дефенсину-2, на основі ліній ембріональної нирки людини (НЕК293) та карциноми легені Л'юїс миші (3LL) створено клітинні модельні системи з різним рівнем експресії бета-дефенсину-2. В експериментальних дослідженнях in vitro, проведених на трансфікованих сублініях, створених на основі лінії НЕК293, показано, що підвищення рівня експресії hBD-2 та його внутрішньоклітинне накопичення призводить до втрати клоногенної активності клітин і зниження їх проліферативних показників більш ніж утричі. Виявлено зниження фосфорилювання рибосомного S6 білка - одного з ключових компонентів білкового синтезу. На модельних системах, створених на основі лінії 3LL, продемонстровано, що зниження рівня експресії мPHK mBD-2 викликає підвищення здатності клітин до колонієутворення та зростання їх проліферативної активності. У дослідах in vitro на експериментальних пухлинах, одержаних з клітин 3LL з різним рівнем експресії мPH< mBD-2 встановлено зворотню кореляцію між експресією дефенсину та швидкістю росту пухлин. У пухлинах і клітинних лініях встановлено пригнічення експресії mBD-2.

  Скачати повний текст

Встановлено, що P2X-опосередковані струми нейронів вузлуватих гангліїв пригнічуються опіоїдами в середньому на 50 % за 8 хв. Зазначено, що у 80 % нейронів пригніченню передує короткотривала потенціація протягом перших 2 - 3-х хвилин прикладання опіоїдів. P2X3-опосередковані струми в нейронах задньокорінцевих спинномозкових гангліїв також пригнічуються опіоїдами на 36 - 55 % залежно від структури опоїдного агоніста. Визначено, що передача сигнала між опіоїдними та P2X-рецепторами всередині клітини опосередковується кількома шляхами за участі G-білків. Встановлено, що ко-культивування нейронів вузлуватих гангліїв щурів з клітинами фібросаркоми миші лінії NCTC 2472 призводить до зміни опіоїдної чутливості нейрональних P2X-рецепторів залежно від кінетики їх десенситизації. Обгрунтовано, що під час ко-культивування зростає кількість нейронів з PX2 опосередкованими струмами, що мають повільну кінетику десенситизації та є малочутливими чи нечутливими до ендоморфіну-1.

  Скачати повний текст