Моногідроксильовані жовчні кислоти, такі як тауролітохолева кислота (TLС) і її трисульфат (TLС-S), підвищують цитозольний кальцій у суспензії гепатоцитів. Вважають, що таке вивільнення відбувається за рахунок ІФ3-чутливого депо, але без утворення ІФ3. Нікотинацидаденіндинуклеотидфосфат (НААДФ) здатний вивільнювати Ca<^>2+ із органоїдів ендолізосомальної системи, яку зараховують до кислотного депо клітин через кислий вміст. Мета роботи - дослідити вплив NED-19 (антагоніста НААДФ) на TLC-S-індуковані зміни вмісту Ca<^>2+ в ізольованих гепатоцитах мишей для того, щоб з'ясувати роль кислотного депо у TLC-S-індукованому вивільненні Ca<^>2+. Ізольовані гепатоцити мишей навантажували 2,5 мкмоль/л fluo-4. Зміни рівня концентрації кальцію в цитозолі реєстрували за допомогою скануючого двофотонного мікроскопа Leica SP2 MP. З метою пермеабілізації гепатоцитів клітини обробляли сапоніном (0,1 мг/мл) у суспензії та навантажували mag-fura-2. Зміни депонованого кальцію реєстрували за спектрофлуориметричним методом. Встановлено, що TLС-S у діапазоні концентрацій 50, 100 і 200 мкмоль/л здатний викликати короткочасне підвищення кальцію в цитозолі ізольованих гепатоцитів мишей. Попередня аплікація 2-АРВ (100 мкмоль/л) не запобігала TLС-S-індукованим Ca<^>2+-сигналам. У суспензії ізольованих гепатоцитів мишей TLС-S вивільнює <$E66,10~symbol С~8,87~%> депонованого кальцію від усієї його кількості, яку здатний вивільнити іономіцин. У проведеному експерименті після дії TLС-S, тапсигаргін ще може вивільнити 47,94 і 13,05 % депонованого кальцію. Після застосування NED-19 (100 нмоль/л) частка кальцію, що вивільнюється TLС-S зменшується і становить лише <33,25~symbol С~2,15~%>. При цьому подальше застосування тапсигаргіну мобілізує тільки <$E21,75~symbol С~10,68~%> депонованого кальцію суспензії гепатоцитів мишей. Отже, попередня аплікація NED-19 статистично достовірно (n = 6; P << 0,01) зменшує частку депонованого кальцію після подальшого додавання TLС-S удвічі. Встановлено, що швидкість TLС-S-вивільнення кальцію з депо збільшується удвічі після попереднього застосування NED-19 (n = 6; P << 0,05). Також і швидкість тапсигаргін-індукованого вивільнення кальцію з депо зростає у 2,5 разу після преінкубації клітин з NED-19 (n = 6; P << 0,01). Зроблено припущення, що у реалізації впливу TLС-S на вміст кальцію в гепатоцитах мишей, окрім тапсигаргін-чутливого, залучене ще й кислотне депо, яке представлене ендолізосомами. Отже, механізм дії TLС-S на кальцієвий гомеостаз досліджуваних клітин є НААДФ-опосередкованим.Відомо, що моногідроксильовані жовчні кислоти, такі як літохолева і таурохолева, суттєво пригнічують секрецію жовчі. Механізм цього явища ще не до кінця з'ясований. Встановлено, що за дії тауролітохолевої кислоти, а також її сульфату, спостерігається збільшення концентрації кальцію в цитозолі внаслідок вивільнення його з внутрішньоклітинних депо [9, 13]. Окрім того, спостерігається зростання рівня натрію в клітині [30]. Припущено, що ці процеси реалізуються за участю йон-транспортувальних помп. Для того, щоб перевірити наше припущення, вивчено вплив 3-сульфо-тауролітохолевої кислоти на активність Ca<^>2+-АТФ-ази, Na<^>+, K<^>+-АТФ-ази та базальної Mg<^>2+-АТФ-ази. Досліди проведено на постмітохондріальній субклітинній фракції печінки щурів, що унеможливлює вплив тауролітохолевої кислоти 3-сульфату на рецептори плазматичної мембрани гепатоцитів. АТФ-азну активність оцінено за вмістом неорганічного фосфору. Встановлено, що 3-сульфо-тауролітохолева кислота пригнічувала активність Ca<^>2+-АТФ-аз та Na<^>+, K<^>+-АТФ-ази, але підвищувала активність базальної Mg<^>2+-АТФ-ази субклітинної фракції печінки щурів. Зроблено висновок, що пригнічення секреції під впливом 3-сульфо-тауролітохолевої кислоти спостерігається через інгібування роботи Na<^>+, K<^>+-АТФ-ази та Ca<^>2+-АТФ-аз, внаслідок чого зростає концентрація кальцію та натрію в цитозолі. Поряд із тим, висловлено припущення, що активування базальної Mg<^>2+-АТФ-ази під впливом 3-сульфо-тауролітохолевої кислоти може свідчити про роль ендолізосомальної системи, так званого кислого депо, у реалізації вивільнення кальцію.

  Повний текст PDF - 457.549 Kb    Зміст випуску     Цитування публікації

  Якщо, ви не знайшли інформацію про автора(ів) публікації, маєте бажання виправити або відобразити більш докладну інформацію про науковців України запрошуємо заповнити "Анкету науковця"