Влияние физиологического состояния клеток бактерий Escherichia coli на экспрессию растворимого белка – рекомбинантного аналога гликопротеина G вируса простого герпеса 2 типа

Коршун, Л. Н.; Мойса, Л. Н.; Ганова, Л. А.; Вудмаска, М. И.; Ковтонюк, Г. В.; Киселёва, Е. К.; Спивак, Н. Я.

Показано, что рекомбинантный белок GST-HSV2gG, содержащий иммунодоминантные области гликопротеина G вируса простого герпеса 2 типа (ВПГ-2), в экспрессирующей клеточной системе бактерий Escherichia coli BL21(DE3) накапливается как в виде телец включений, так и в растворимой форме. При этом соотношение между белковыми фракциями варьирует в зависимости от физиологического состояния клеток перед запуском биосинтеза. Методом математического моделирования кривых роста, на основе применения логистической функции Ферхюльста, определены кинетические показатели роста бактериальной популяции. Установлено, что индукция биосинтеза в фазе ускорения роста культуры (при ОП600 = 0,3 о.е.) с использованием 0,1 мМ ИПТГ позволяет получить максимальный выход растворимого белка (26,75 мг/л или 17,6 мг/г биомассы). Разработан метод двухэтапной хроматографической очистки целевого продукта с применением технологий иммобилизованной металл-аффинной и аффинной хроматографий. Антигенная активность растворимого белка GST-HSV2gG достоверно (в три раза) превышала величину активности рекомбинантного белка, очищенного из телец включений (<$Ep~<<~0,05>) и была сопоставима с аналогичным показателем коммерческого образца (<$Ep~>>~0,05>), что позволяет использовать полученный препарат в составе иммуносорбента тест-системы для диагностики IgG к ВПГ-2.


	Наукова періодика України		Microbiological journal