Цель исследования - выявление особенностей повреждений клеток Saccharomyces cerevisiae, свободных и иммобилизованных в геле альгината натрия, в результате их криоконсервирования. Объектом исследования были клетки дрожжей Saccharomyces cerevisiae. С помощью флуоресцентных красителей AnnexinV и 7AAD методом проточной цитометрии проведена оценка повреждений деконсервированных клеток S. cerevisiae. Характерными признаками негативного воздействия низких температур было нарушение целостности и липидной асимметрии цитоплазматических мембран (ЦПМ), фрагментация ДНК. Проведенный анализ асимметричного распределения фосфолипидов в мембране клеток дрожжей S. cerevisiae показал, что перестройки в липидной организации мембраны в процессе криоконсервирования могут происходить не только под воздействием физико-химических факторов, но и под влиянием криопротекторов. Выход фосфатидилсерина в наружный монослой ЦПМ наблюдали у 2,5 % иммобилизованных клеток (2 группа). Количество AnnexinV - меченых клеток в группе 4 было в 2 раза больше относительно количества сохранных клеток после замораживания. Подобная динамика наблюдалась и в отношении такого рода повреждений в образцах свободных клеток. Однако, следует отметить, что количество AnnexinV - меченых клеток в группе 1 было значительно меньше и сопоставимо с контрольными образцами. Предполагается, что снижение клеток с нарушением асимметричного распределения фосфолипидов в этой группе происходило за счет увеличения количества полностью разрушенных (не подвергшихся анализу) клеток в этих образцах. Установлено, что во всех исследуемых образцах, включая контрольные, присутствуют клетки, находящиеся на различных стадиях апоптоза. Разница в образцах заключается в значении процента клеток элиминированных из процесса анализа проточной цитометрии. Количество полностью разрушенных клеток в иммобилизованных образцах было значимо меньше, чем в группах свободных в суспензии клеток. Выводы: установлено, что под влиянием повреждающих факторов процесса целостности и липидной асимметрии цитоплазматических мембран, фрагментация ДНК. Показано, что наличие криопротектора ДМСО в консервирующей среде приводит к увеличению числа криоконсервированных клеток с асимметричным распределением фосфолипидов в клеточных мембранах. Количество клеток, находящихся на ранней стадии апоптоза после замораживания под защитой ДМСО, в 2 - 2,5 раза превышало количество аналогичных клеток, замороженных без криопротектора. Криоконсервирование дрожжей в полисахаридном геле альгината натрия может являться альтернативным способом консервации биообъектов под защитой традиционных криозащитных средств, позволяющим достичь высокой степени жизнеспособности и сохранности клеток без использования криопротекторов.

  Повний текст PDF - 444.596 Kb    Зміст випуску     Цитування публікації

  Якщо, ви не знайшли інформацію про автора(ів) публікації, маєте бажання виправити або відобразити більш докладну інформацію про науковців України запрошуємо заповнити "Анкету науковця"