Розроблено метод ампліфікації та клонування гену Erns вірусу діареї (ВД) великої рогатої худоби (ВРХ) з метою одержання позитивного контролю для полімеразної ланцюгової реакції. Використано ВД ВРХ I типу штам Ossloss та II типу штам Kosice. Вірусну РНК екстрагували за допомогою методу афінної сорбції. Ампліфікацію ділянки гену Erns здійснювали з використанням специфічних праймерів. ПЛР-продукт був інтегрований до вектору для клонування pTZ57R/T. Для напрацювання рекомбінантних плазмід проводили трансформацію клітин бактерії E. coli DH10B. Плазмідвмісні клони виявляли за допомогою селективного поживного середовища, вставку - методом ПЛР. Наявність вставки гена Erns підтверджували за допомогою рестрикційного аналізу з використанням рестриктаз EcoRI та HindIII. В ході проведених досліджень були сконструйовані рекомбінантні плазміди, які несуть вставку фрагменту гену Erns (826 пар нуклеотидів) збудників ВД ВРХ I та II типів. Одержані рекомбінантні плазміди можуть використані в якості позитивного контролю для ПЛР.

  Повний текст PDF - 965.732 Kb    Зміст випуску     Цитування публікації

  Якщо, ви не знайшли інформацію про автора(ів) публікації, маєте бажання виправити або відобразити більш докладну інформацію про науковців України запрошуємо заповнити "Анкету науковця"