Мета роботи - для детального вивчення властивостей фактора елонгації трансляції eEF1B<$Egamma> людини і його взаємодії з партнерами оптимізувати експресію кДНК повнорозмірного білка та його вкорочених форм. Зазначено, що кДНК, які кодують вкорочені форми eEF1B<$Egamma>, синтезовано за допомогою методу ПЛР-ампліфікації з відповідними праймерами і клоновано у вектори, що містять які афінну мітку полігістидинову послідовність, глутатіон S-трансферазу або білок, який зв'язує мальтозу. Рекомбінантні білки експресували в бактеріях і очищували афінною хроматографією. Агрегатний стан одержаних білків проаналізовано з використанням аналітичної гель-фільтрації. Оптимізовано експресію, очищення й умови зберігання повнорозмірного рекомбінантного His-eEF1B<$Egamma>. Також експресовано і очищено до гомогенного стану кілька вкорочених форм eEF1B<$Egamma>. Дві вкорочені форми C-кінцевого домену, які містять амінокислотні залишки 263-437 і 228-437, одержано у вигляді розчинних мономерних білків. Дві вкорочені форми N-кінцевого домену, що містять амінокислотні залишки 1-33 і 1-230, злиті з глутатіон S-трансферазою, одержано у вигляді димерів згідно з результатами гель-фільтрації. Інші делеційні мутанти, які містять амінокислотні залишки 1-93 і 1-165 N-кінцевого домену та злиті з білком, що зв'язує мальтозу, можуть бути одержані лише у вигляді розчинних високомолекулярних агрегатів. Висновки: одержано і охарактеризовано рекомбінантний білок His-eEF1B<$Egamma> та його 4 вкорочені форми. Ці форми в подальшому буде використано для вивчення білково-білкових взаємодій.

  Повний текст PDF - 352.323 Kb    Зміст випуску     Цитування публікації

  Якщо, ви не знайшли інформацію про автора(ів) публікації, маєте бажання виправити або відобразити більш докладну інформацію про науковців України запрошуємо заповнити "Анкету науковця"