Установлено, что в результате применения препарата "Криоцелл-гемокорд" наблюдается длительный профилактический эффект, который обеспечивает невосприимчивость исследуемых животных к вирусу гриппа в течение 6 мес с момента его интраназального введения. Выявлено стимулирующее действие препарата на иммунокомпетентные органы мышей до и после заражения вирусом гриппа. Профилактическое применение препарата замедляет темпы репликации вируса. Интерес представляет дальнейшее изучение механизма противовирусного действия препарата "Криоцелл-гемокорд".

Розроблено та практично апробовано методику ідентифікації пандемічного штаму вірусу грипу A/H1N1 за методом одностадійної реверс-транскрипційної полімеразної ланцюгової реакції (РТ-ПЛР). Адаптовано рекомендований ВООЗ протокол для проведення диференціальної діагностики вірусу грипу A/H1N1 за умов сучасних ПЛР-лабораторій України. Знижено вартість дослідження за рахунок відпрацювання методики виділення вірусної РНК та використання загальновживаних ферментних систем для ПЛР аналізу. Показано ефективність даної методики в порівнянні із одностадійною РТ-ПЛР, рекомендованою ВООЗ з використанням комерційних ПЛР наборів.

Мета роботи - провести генетичний аналіз сегментів, що кодують гемаглютинін (HA) та нейрамінідазу (NA) вірусів грипу типу A(H3N2), виділених в Україні в епідемічному сезоні 2011 - 2012 років. Використано методи: real-time RT-PCR, робота з культурою клітин MDCK-siat, секвенування і філогенетичний аналіз. Проаналізовано генетичні сегменти HA і NA українських вірусів грипу A(H3N2), виділених у епідсезоні 2011 - 2012 рр., та побудовано відповідні філогенетичні дерева методом об'єднання найближчих сусідів (Neighbor-Joining) з використанням моделі Kimura 2-parameter. Статистичну оцінку філогенетичного аналізу проведено із застосуванням методу бутстреп-аналізу (Bootstrap). Проаналізовано генетичну подібність досліджуваних ізолятів до вакцинного штаму та вірусів, виділених у світі. Детально проаналізовано всі генетичні групи кластера Victoria/208, куди увійшли виділені ізоляти. Описано ключові мутації в амінокислотних послідовностях HA і NA. Виявлено множинні шляхи заносу епідемічних вірусів грипу A(H3N2) в сезоні 2011 - 2012 рр. в Україну. Мутації в гемаглютиніні українських ізолятів знаходились у високоваріабельних ділянках і не були пов'язані зі зміною властивостей вірусів. Аналіз амінокислотних послідовностей NА показав відсутність мутацій E119V, E119V+I222V, R292K і N294S, з якими асоціюють появу резистентності до озельтамівіру та занамівіру.

Мета роботи - здійснити філогенетичний аналіз сегментів, кодуючих гемаглютинін та нейрамінідазу пандемічних вірусів грипу A(H1N1)pdm, виділених в Україні. Методи дослідження - полімеразно-ланцюгова реакція у реальному часі (real-time RT-PCR), секвенування і філогенетичний аналіз. Проаналізовано ключові мутації в амінокислотних послідовностях поверхневих антигенів досліджуваних вірусів. Виявлено високу генетичну подібність (99 %) українських ізолятів до вірусів, виділених в інших країнах. Висновки: показано стабільність генів українських ізолятів протягом пандемічного сезону 2009 - 2010 рр.

Індекс рубрикатора НБУВ: Р264.914-8 + Е326.222.15*716-633.3

Рубрики:

Вірус грипу

Orthomyxoviridae вірус грипу

Шифр НБУВ: Ж22412/а Пошук видання у каталогах НБУВ 

Дослідження присвячено вивченню генетичного різноманіття, пошуку амінокислотних заміщень та встановленню динаміки еволюційної мінливості вірусів грипу людей типів А та В, виділених в Україні з 2007 до 2012 рр. З використанням методу об'єднання найближчих сусідів (NJ) побудовано унікальні філогенетичні дерева, де показана генетична подібність досліджуваних ізолятів до вірусів з інших країн та вакцинних штамів. Вперше виявлено занесення епідемічних штамів з інших країн для всіх субтипів / генетичних ліній вірусів грипу людей. Показано динаміку еволюційної мінливості вірусів грипу людей, виділених в Україні протягом останніх п'яти років із застосуванням методу максимальної правдоподібності (ML) та математичних моделей, підібраних для кожної конкретної вибірки для філогенетичного аналізу. Проаналізовано амінокислотні послідовності та виявлено ключові заміщення в гемаглютиніні та нейрамінідазі вірусів грипу людей типу A: A(H1N1), A(H3N2), A(HlNl)pdm та типу В обох актуальних генетичних гілок - Yamagata і Victoria.

За умов експерименту виявлено окремі механізми адаптації для різних штамів вірусів грипу до нового хазяїна - висока адаптаційна активність штаму вірусу грипу A Port Chalmers 1/73 (H3N2) та низька-для штаму вірусів грипу A/FM/1/47 (H1N1). Показано, що високу адаптаційну активність штаму A Port Chalmers 1/73 (II3N2) обумовлюють високий рівень репродукції (гемаглютинуюча, нейрамінідазна, інфекційна активності, експресія транскриптазного гену РВІ) на ранніх етапах адаптації (2 - 3 пасажах) та наявність сіалоспецифічних рецепторів. Низьку адаптаційну активність вірусу грипу штаму A/FM/I/47 (H1N1) обумовлюють низький рівень репродукції вірусу (НА, інфекційна активність, експресія транскриптазного гену РВІ) та необхідність крім сілоспецифічного рецептору додаткового рецептору N-ацетилглюкозаміну. Показано, що лектини (Лективір) гальмує репродукцію вірусів грипу А (H3N2) та A (H1NI). Механізмом гальмування є зв'язування сіаловмісних рецепторів лектинами (Лективір). Виявлено антигрипозну активність нових форм флавоноїдів (Протефлазид), механізм дії його відбувається за рахунок інгібіції нейрамінідазної активності вірусу грипу й індукції інтерферонів. Доведено, що елаготанін (Альтабор) є інгібітором нейрамінідази вірусу грипу з інтерфероніндукуючими властивостями, що обумовлює антигрипозну активність.

Отмечено, что продолжающаяся дискуссия вокруг создания контагиозного вируса гриппа H5N1 показала существование строгих ограничений для предотвращения злоупотреблений в области наук о жизни посредством надзора над планами и публикациями. Утверждается, что для того, чтобы избежать потенциальной тотальной милитаризации наук, связанных с жизнью, необходимо, чтобы ученые - специалисты в области естественных наук - осознавали свою ответственность в контексте Конвенции о биологическом и токсикологическом оружии (BTWC) и делали активный вклад в контроль над режимом нераспространения биологического оружия.

Цель работы - проведение филогенетического анализа генов нейраминидазы вирусов гриппа A(H3N2), выделенных к Украине в 2013 - 2014 сезоне. Использованы методы молекулярной генетики, филогении и математической статистики. Высокая (94 %) генетическая схожесть украинских изолятов, выделенных в эпидемический сезон в других странах, свидетельствует о стабильности вирусной популяции в Украине. Расположение украинских изолятов вирусов гриппа в трех различных кластерах свидетельствует о различных путях попадания вирусов на территорию Украины. Анализ последовательностей NA выявил в большинстве украинских изолятов новые замещения аминкислот в положениях Y155F, D251V, S315G. Ни один из исследованных изолятов вируса гриппа не имел в последовательности NA мутации E119D, с которой ассоциируют резистентность к осельтамивиру. Большинство случаев респираторных заболеваний человека вызваны вирусами. Поверхностные гликопротеины вируса гриппа являются высоко вариабельными, вследствие чего способны избегать воздействия иммунной системы хозяина. Исследование генетических изменений среди всех штаммов вирусов гриппа является важным для определения происхождения сегментов РНК вирусов гриппа A(H3N2) от одного или нескольких разных хозяев. Применение филогенетического анализа позволяет проводить мониторинг уровня и направления изменчивости вирусов гриппа практически в реальном времени. Более того, сравнение аминокислотных последовательностей делает возможным выявление начала новых замещений и наблюдать механизмы адаптации вируса к иммунной системе человека. Обычно для филогенетического анализа используют последовательности поверхностных антигенов - гемагглютинина (HA) и нейраминидазы (NA). Цель работы - провести филогенетический анализ последовательностей NA вирусов гриппа A(H3N2), выделенных в Украине в 2013 - 2014 сезоне.

Мета роботи - зробити філогенетичний аналіз генів гемаглютиніну (HA) і нейрамінідази (NA) вірусів грипу А (H3N2), що були поширені в Житомирській області під час епідемічного сезону 2013 - 2014 рр. і порівняти їх з тими, що циркулювали у світі. Лабораторну діагностику здійснювали за допомогою ПЛР у реальному часі (real-time RT-PCR). Проведено секвенування та філогенетичний аналіз. В епідемічному сезоні 2013 - 2014 рр. вперше було зроблено секвенування генів HA та NA вірусів грипу A (H3N2), виділених з клінічного матеріалу хворих з Житомирської області та у подальшому увійшли до бази даних вірусів грипу з усього світу (GISAID). Висновки: Житомирські ізоляти розташувались поряд з українським ізолятом з Харкова, а серед світових поряд з ізолятами з Німеччини, Румунії, Італії. У послідовностях генів гемаглютиніну було виявлено заміщення I214T. Виділені ізоляти в епідемічному сезоні 2013 - 2014 рр. мали високу генетичну спорідненість (99 %) до вірусів, що знаходяться в групі на філогенетичному дереві, тому що мають синонімічне заміщення. Житомирські ізоляти розташувались у домінуючій групі в світі 3С групи 3 генетичного кластеру A/Victoria/208 і були подібними до вакцинного штаму A/Texas/50/2012. У послідовностях генів нейрамінідази суттєвих заміщень виявлено не було. Житомирські ізоляти, як і багато українських та світових ізолятів виявились подібними до референс-штаму A/AthensGR/112/2012, ніж до більш нових референс-вірусів.

За результатами опосередкованого визначення кількості титру вірусу грипу за допомогою методу гемаглютинації виявлено, що комплекси олігорибонуклеотидів з D-манітолом (ОРН-D-М) перешкоджають утворенню гемаглютинін-гліканової взаємодії. Інфекційність вірусу грипу H1N1 (A/FM/1/47) знижується після інкубації з ОРН-D-М. Показано, що ОРН-D-М виявляють віруцидну дію проти вірусу грипу.

Мета роботи - проаналізувати потенційну біологічну активність та мішень дії похідних ефірів поліфтороалкантіоацильованих амінокислот за допомогою методів in silico, а також вивчити прогнозовані властивості in vitro. Було використано програмне забезпечення PASS, веб-сервер PharmMapper, ПЛР, МТТ-аналіз, забарвлення трипановим синім та метод нейтрального червоного. Згідно з прогнозом PASS, дві сполуки (10S20 та 10S21) можуть мати противірусну активність, Pa/Pi становить 0,294/0,005 та 0,214/0,084, відповідно. Крім того, всі сполуки можуть бути субстратами цитохрому c, який відіграє важливу роль в індукції апоптозу. Кілька мішеней було визначено за допомогою молекулярного стикування (PharmMapper). Було показано, що більшість прогнозованих мішеней є білками, зокрема, вірусний білок Gag-Pol та різні види протеїнкіназ. Дослідження in vitro показало, що всі сполуки інгібують реплікацію вірусу Епштейна - Барр. З іншого боку, похідні ефірів поліфтороалкантіоацильованих амінокислот мали високий рівень цитотоксичності на різних лініях лимфобластоїдних клітин, що може бути зумовлено механізмом дії сполук. Висновки: дослідження in silico є перспективним підходом до розробки нових антивірусних препаратів. Одержані результати надають змогу віднести сполуку трет-бутил (2,2,3,3-тетрафторопропантіоїл)аланінат до перспективних анти-ВЕБ агентів. Одержані дані показали, що похідні ефірів поліфтороалкантіоацильованих амінокислот (10S21 та 10S22) можуть мати апоптоз-модулювальний вплив, що є ключовим аспектом під час розробки препаратів для онкологіних захворювань, індукованих вірусними інфекціями.

Мета роботи - молекулярний та філогенетичний аналіз пандемічних вірусів грипу A(H1N1), що циркулювали в Україні протягом сезону 2014 - 2015 рр. Зразки було проаналізовано за допомогою методу полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) в реальному часі. Філогенетичні дерева будували в програмі MEGA 6. Сиквенси українських ізолятів вірусів грипу A(H1N1)pdm були подібними до вакцинного штаму A/California/07/2009. Більшість штамів належали до кладу 6B. Серед досліджуваних ізолятів виявили мутацію H275Y в гені нейрамінідази, яка зумовлює стійкість до озельтамівіру. Висновки: базуючись на сиквенсах генів HA і NA вірусів грипу побудували філогенетичні дерева. Український вірус, виділений в сезоні 2014 - 2015 рр. мав специфічну мутацію, яку асоціюють з стійкістю до противірусних препаратів, таких як озельтамівір.

Індекс рубрикатора НБУВ: Е326.222.15 + Р281.811.6

Рубрики:

Orthomyxoviridae вірус грипу

Противірусні препарати

Шифр НБУВ: Ж14252 Пошук видання у каталогах НБУВ 

Мета роботи - вивчення впливу олігорибонуклеотидів на експресію генів nos2, xdh, arg2 у легенях мишей під час інфекції вірусу грипу. Для досягнення мети автори застосували полімеразну ланцюгову реакцію у режимі реального часу та аналіз перекисного окиснення ліпідів. Надмірну експресію мРНК генів nos2, xdh, arg2 було виявлено після 48-годинного інфікування вірусом грипу. Показано, що олігорибонуклеотиди перешкоджають надмірній експресії генів nos2, xdh, arg2, яка індукована вірусом грипу. Вони також зменшують рівень продуктів перекисного окиснення ліпідів у разі інфікування вірусом грипу. Висновки: олігорибонуклеотиди нормалізують підвищену регуляцію про-оксидантних генів, яка індукована інфекцією вірусу грипу. Пригнічуючи надекспресію цих генів, олігорибонуклеотиди знижують рівень перекисного окиснення ліпідів під час інфекції вірусу грипу. Порушення надекспресії даних генів під час інфекції вірусу грипу може бути одним із елементів механізму дії олігорибонуклеотидів, відомого протизапального та протигрипозного препарату.

Мета дослідження - провести філогенетичний та молекулярно-генетичний аналіз генів HA вірусів грипу, що циркулювали на території України протягом епідемічного сезону 2016 - 2017 рр. та порівняти їх з тими, що циркулювали у світі. Зразки (назофаригіальні змиви від паціентів) було проаналізовано за допомогою методу полімеразної ланцюгової реакції в реальному часі (ЗТ- ПЛР). Філогенетичні дерева будували у програмі MEGA7. 3D структури будували у програмі Chimera 1.11.2rc. Українські ізоляти мали заміни в антигенних сайтах, що виникли у попердніх сезонах та епідемічному сезоні 2016 - 2017 рр. і не виявлялись раніше, які можуть мати вплив на антигенні властивості вірусу. Не дивлячись на це, віруси грипу A(H3N2) та B/Victoria зберегли подібність до вакцинних штамів. Для вірусів грипу A(H1N1)pdm09 було показано вищу подібність до вакцинного штаму, рекомендованого на епідемічний сезон 2017 - 2018 рр. Висновки: в епідемічному сезоні 2016 - 2017 рр. всі віруси грипу - A(H3N2), A(H1N1)pdm09 та B/Victoria набули значну кількість унікальних амінокислотних заміщень в гені гемаглютиніну. Результати цього дослідження підтверджують постійну генетичну мінливість циркулюючих вірусів сезонного грипу та необхідність постійного систематичного антигенного та молекулярного нагляду.

На основі філогенетичного порівняння проаналізовано стан мінливості вірусів грипу людей, виділених в Україні протягом 2012 - 2015 рр. за антигенними і генетичними характеристиками. Подано детальну етіологічну структуру вірусів грипу протягом досліджуваних сезонів та порівняно її з етіологічною структурою європейських країн та світу. Виявлено відмінності та зроблено порівняльну характеристику за домінуючим збудником в Україні та в інших країнах. На основі аналізу амінокислотних послідовностей генів НА та NA вірусів грипу 2012 - 2015 рр. Виявлено унікальні амінокислотні заміщення, притаманні лише вірусам грипу, що циркулювали в Україні. Виявлено мутації, що відрізняють ці віруси від таких, які циркулювали в світі упродовж досліджуваного періоду. Виконано посезонний порівняльний аналіз амінокислотних заміщень вірусів грипу людей типу A: A(HlNl)pdm09, A(H3N2) та типу В генетичної гілки - B/Yamagata, які циркулювали в Україні та інших країнах в цей час. Встановлено різноманіття циркулюючих збудників грипу, які належали до різних генетичних кластерів протягом періоду спостереження. Одержані дані під час виконання роботи дають змогу дослідити мінливість вірусів грипу за антигенними та генетичними характеристиками, їх гетерогенність. Доведено, що одержані результати дають змогу в майбутньому поліпшити етіологічне прогнозування наступних епідемій грипу та домінуючих збудників в країні.

Досліджено вплив добору на формування різноманітності вірусів грипу, циркулюючих в епідемічних сезонах з 2009 до 2015 роки в Україні та проведено моніторинг чутливості вірусів грипу до противірусних препаратів - інгібіторів нейрамінідази. Вперше за період дослідження вірусів грипу в Україні із застосуванням біоінформатичних методів визначено вплив добору на формування різноманітності вірусів грипу, циркулюючих в Україні, та на появу стійкості до інгібіторів нейрамінідази. Тобто виявлено вплив добору на ключові заміщення в гені нейрамінідази вірусів грипу людей типу A: A(H1N1), A(H3N2), A(H1N1)pdm та типу В генетичних гілок Yamagata і Victoria. У результаті моніторингових досліджень чутливості ізолятів вірусів грипу до інгібіторів нейрамінідази вперше в Україні була доведена наявність резистентних штамів до інгібіторів нейрамінідази. Раптова поява резистентних ізолятів A(H1N1)pdm на території України свідчить про необхідність щорічних моніторингових досліджень чутливості вірусів грипу до NAI навіть за відсутності резистентності у попередній період для вчасного адекватного застосування цих препаратів з лікувальною метою.

Індекс рубрикатора НБУВ: Е326.222.15 + Р264.914

Рубрики:

Orthomyxoviridae вірус грипу

Вірус грипу

Шифр НБУВ: РА431572 Пошук видання у каталогах НБУВ 

Робота присвячена вивченню можливого інгібування інфекційності вірусу грипу шляхом взаємодії олігорибонуклеотидів (ОРН) з гемаглютиніну (НА) та перешкоджання ОРН гіперекспресії генів вродженого імунітету у відповідь на інфекцію вірусу грипу. Вперше показано, що препарати ОРН мають пряму інактивуючу дію на вірус грипу A/FM/1/47/H1N1, яка проявлялася у інгібуванні цитопатичної дії вірусу грипу у клітинах MDCK. З'ясовано, що ОРН та ОРН-D-M знижують інфекційність вірусу грипу та інгібують зв'язування білків НА вірусу грипу до залишків сіалової кислоти гліканів еритроцитів. На ізольованому НА, показано взаємодію між HA і ОРН, ОРН-D-М з доволі низькою афінністю, яка призводить до інгібування активності НА. Досліджено, що вірус грипу штаму A/FM/1/47/H1N1 викликає гіперекспресіїю мРНК генів уродженого імунітету (Xdh, Nos2, Arg2, Oas1α, Oas2, Oas3, Mx1, Eif2αk2, Ifnε, Ifnk, Ifnα2, Ifnβ1, Ifnγ, Ccl3, Ccl4, Ccl5, Cxcl9, Cxcl10, Cxcl11, Il6, Il1β, Il12α, Tnfα, Nfkb1, Nfkbia, Tlr3, Tlr7 та Тlr8) у тканинах легенів мишей лінії BALB/c. Вперше визначено підвищену експресію мРНК Ifnε, Ifnk за умов інфекції грипу у тканинах легенів мишей. Введення ОРН та ОРН-D-M мишам за профілактичною та лікувальною схемами призводило до зниження рівнів мРНК генів вродженого імунітету, чия транскрипція була індукованою грипом. Ослаблення надекспресії генів вродженого імунітету (Nfkb1, Nfkbia, Xdh, Nos2) терапевтичними ОРН спостерігалося також на рівні трансляції. Запропоновано, що за умов інфекції вірусу грипу у легенях мишей препарати ОРН та ОРН-D-М пригнічують гіперекспресію Tlr3, Tlr7, Tlr8, яка призводить до перешкоджання підвищення експресії TLR-стимульованих генів вродженого імунітету. Природні ОРН інгібують інфекційність вірусу грипу за рахунок взаємодії з НА та модулюють надмірну вроджену імунну відповідь на вірус грипу шляхом взаємодії з TLR-3, TLR-7, TLR-8.