Вивчено особливостi адаптацiї методу полiмеразної ланцюгової реакцiї для дiагностики та монiторингу лейкозу великої рогатої худоби з використанням молока, одержаного вiд корiв рiзної стадiї лактацiї.

З метою з'ясування динаміки змін, їх взаємозалежності у здорової, інфікованої і хворої лейкозом великої рогатої худоби проведено гематологічні, імунологічні та біохімічні дослідження, що дозволило прослідкувати за змінами в процесі розвитку запального процесу у випадку лейкозу.

Уперше з використанням імуноферментного методу діагностики вивчено особливості постколострального імунітету у телят, що народилися від лейкозних корів. До напування телят молозивом внутрішньоутробне інфікування вірусом лейкозу за результатами ІФА виявлено у 12,5 %, за результатами РІД - у 6,2 % тварин. Відзначено, що дослідження телят за методом ІФА дозволя своєчасно видалити інфікованих внутрішньоутробно і тим самим запобігти поширенню інфекції. Теоретично й експериментально обгрунтовано та впроваджено у систему оздоровчих протилейкозних заходів імуноферментний метод діагностики, який міститься у проекті інструкції з профілактики та заходів боротьби з лейкозом великої рогатої худоби (ВРХ), що дозволяє істотно підвищити ефективність заходів щодо ліквідації захворювання. Відзначено, що висока чутливість цього методу, правильна організація оздоровчих методів дозволяють значною мірою знизити інцидентність захворювання. За методом ІФА встановлено, що у господарствах з незначним поширенням онкорнавірусної інфекції стадія максимального зростання епізоотії швидко переходить у стадію згасання, оскільки метод дозволяє виявляти тварин, інфікованих вірусом лейкозу ВРХ, яких не було виявлено за допомогою реакції імунодифузії. Установлено, що у господарствах зі значним поширенням лейкозної інфекції застосування ІФА суттєво змінює розвиток епізоотичного процесу. Виявлено, що у певної частини тварин захворювання має прихований перебіг, а інкубаційний період значно варіює. Відзначено, що у разі використання для діагностики лейкозної інфекції реакції імунодифузії епізоотичний процес характеризується мінливістю та значним коливанням рівня

Вивчено епізоотичну ситуацію та розроблено імуноферментну тест-систему для діагностики лейкозу великої рогатої худоби (ВРХ). З'ясовано наявність значного та нерівномірного поширення цієї хвороби у ВРХ у світі. Зазначено, що більшість країн з розвинутим тваринництвом промислового типу є неблагополучним щодо цієї хвороби. Серед 15-ти країн, які шляхом реалізації оздоровчих засобів досягли епізоотичного благополуччя, 13 належать до Європейського Союзу, більшу кількість випадків захворювання на лейкоз установлено у країнах Східної Європи. Показано, що в Україні епізоотична ситуація загострилася з 1995 р. та має тенденцію до покращання з 1998 - 1999 рр., а безпосередньо на Харківщині має місце стійке зниження рівня превалентності спостережено з 2003 р. Показано більш високу чутливість імуноферментної діагностики лейкозу у порівнянні з традиційною реакцією імунодифузії. Обгрунтовано необхідність розробки вітчизняної імуноферментної тест-системи. Створений діагностичний набір відповідає вимогам чутливості та специфічності, який передбачає використання як антигену рекомбінантних білків p24 та qp51 вірусу лейкозу ВРХ. Під час проведення комісійних випробувань розробленої тест-системи специфічність набору дорівнювала 96,0 %, чутливість - 100 %. Під час проведення серійних діагностичних досліджень проб сироватки крові ВРХ з використанням розробленого набору виявлено на 7,5 - 22,1 % більше серопозитивних тварин, ніж у разі застосування реакції імунодифузії.

Показано, що для серологічної діагностики лейкозу великої рогатої худоби застосовують різні методи, зокрема РІД, РДП тощо. Останнім часом для ретроспективної діагностики лейкозу здебільшого використовують імуноферментний аналіз (ІФА). У дослідженнях встановлено, що ІФА є більш чутливим методом ретроспективної діагностики лейкозу великої рогатої худоби, оскільки дозволяє виявляти інфікованих тварин на більш ранніх стадіях, ніж РІД. За даними, ІФА переважав за чутливістю РІД у 1,36 - 4,18 рази. За результатами досліджень зроблено висновок, що застосування для серологічної діагностики ІФА дає змогу виявити майже всіх інфікованих тварин у стаді, а тому сприяє не лише поліпшенню епізоотичної ситуації в господарстві, але й дає змогу одержувати більш якісну та екологічно чисту продукцію.

Базуючись на міжнародних рекомендаціях, проведено уніфікацію методів контролювання та оцінки показників якості вітчизняних тест-систем, що призначені для діагностики лейкозу великої рогатої худоби в реакції імунодифузії. На основі Міжнародних стандартів розроблено та впроваджено Національний стандарт лейкозних сироваток крові, який використовується при посерійному контролі якості діагностикумів. Проведена робота зі стандартизації та уніфікації оцінки якості тест-систем для діагностики лейкозу великої рогатої худоби в РІД позитивно вплинула на показники якості вітчизняних препаратів.

Наведено дані щодо розповсюдження вірусного лейкозу великої рогатої худоби та характеристика його збудника. Стисло розглянуто відомості про молекулярно-генетичні та імунологічні властивості вірусу. Особливу увагу приділено біохімічній діагностиці інфекційного лейкозу з використанням традиційних серологічних методів і методу полімеразної ланцюгової реакції. Описано сучасні інструментальні серологічні методи діагностики лейкозу, розроблені на підставі принципів біосенсорики. Зроблено порівняльний аналіз існуючих і наново створених методів біохімічної діагностики даного захворювання.

На основе эффекта поверхностного плазменного резонанса, исходя из определения уровня индуцированных вирусом лейкоза антител в сыворотке крови животных, разработан вариант иммунного сенсора для экспрессной диагностики лейкоза крупного рогатого скота. Антиген вируса лейкоза, выпускаемый серийно для широких скрининговых исследований методом реакции иммунодиффузии, нельзя непосредственно использовать в иммуносенсорном анализе, поскольку он требует дополнительной очистки. Иммуносенсорный анализ является более чувствительным, быстрым и простым по сравнению с традиционным методом - реакцией иммунодиффузии, что позволяет проводить скрининг лейкоза у животных непосредственно в хозяйствах при минимальном разведении сывороток крови 1 : 500.

Показана возможность определения уровня индуцированных вирусом лейкоза антител в сыворотке молока животных с помощью иммунного сенсора на основе эффекта поверхностного плазмонного резонанса, что может быть использовано для экспрессной диагностики лейкоза крупного рогатого скота. Поскольку иммуносенсорный анализ является более чувствительным, быстрым и простым по сравнению с традиционным методом, это позволяет проводить скрининг лейкоза непосредственно в хозяйствах, а минимальным разведением сывороток молока при этом следует считать 1 : 20.

Розроблено систему праймерів для мультиплексної полімеразної ланцюгової реакції з метою одночасного визначення статі передімплантаційних ембріонів і детекції вірусу лейкозу великої рогатої худоби у їх геномі, середовищі для культивування. Набори праймерів, апробовані на лімфоцитах крові ВРХ, дозволяють правильно визначити стать усіх досліджених тварин.

Здійснено комп'ютерний аналіз геномів ізолятів вірусу лейкозу великої рогатої худоби (ВЛ ВРХ) з GenBank. Запропоновано універсальний алгоритм вибору праймерів для детекції інфекційних агентів за допомогою полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР). Сконструйовано праймер-систему для визначення ВЛ ВРХ завдяки двораундовій гніздовій ПЛР. Доведено, що на чутливість та специфічність ПЛР-аналізу істотно впливає ступінь гомології праймерів, що використовуються. Виконано порівняння праймер-систем, які використовуються для ПЛР-аналізу ВЛ ВРХ у різних лабораторіях.